總超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒(NBT 核黃素微板法)的產(chǎn)品使用注意事項

總超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒(NBT 核黃素微板法)的產(chǎn)品簡介

產(chǎn)品簡介：

超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)是含金屬輔基的酶，能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成過氧化氫(H2O2)和氧氣(O2)，是生物體內一種重要的抗氧化酶，由于超氧自由基是不穩(wěn)定的的自由基，壽命極短，SOD 活性一般用間接方法測定，并利用各種呈色反應來測定 SOD 活力，其中顯色劑有 NBT(唑藍四氮)、WST-1、WST-8 等?？偝趸锲缁?SOD)檢測試劑盒(NBT 核黃素微板法)(Total Superoxide Dismutase Assay Kit with NBT)是一種基于 NBT 的光還原反應，所以又稱作 NBT 光還原法，檢測原理是在有氧化物質存在下核黃素被光還原，在有氧條件下，被還原的核黃素極易再氧化產(chǎn)生超氧陰離子自由基(O2.-)，O2.-可將氮藍四唑還原為藍色的甲腙，后者在 560nm處有強吸收，而 SOD 可清除超氧陰離子(O2.-)，從而抑制了甲腙的形成。于是光還原反應后，反應液藍色愈深，說明 SOD 活性愈低，反之酶活性愈高，據(jù)此通過酶標儀比色分析就可以計算出樣品中總超氧化物岐化酶活性水平。本方法是利用 SOD 抑制 NBT 在光照下的還原作用來確定酶活性大小，可用于檢測植物、組織、細胞、血清或其它樣品中 SOD 活性。

該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、生理鹽水或 PBS

2、電子天平、剪刀、低溫冰箱或制冰機、冰袋、勻漿器或研缽、離心機、離心管、小試管、 光照培養(yǎng)箱光源或 40W 熒光燈或日光燈、測光儀(照度計)、酶標儀、96 孔板

注意事項：

1、 上述低溫試劑避免反復凍融，以免失效或效率下降。待測樣品-70℃可保存 1 個月，需注意反復凍融會導致 SOD 部分失活。

2、 植物中的多酚類物質會引起酶蛋白不可逆沉淀，使酶失去活性，因此在提取 SOD 酶時，必須添加多酚類物質的吸附劑，將多酚物質除去，避免酶蛋白變性失活。SOD 提取試

劑含有 PVP 等成分，可有效去除多酚類物質。SOD 提取試劑不夠用可以用磷酸鈉緩沖液(0.05M,pH7.8)替代。

3、 細胞或組織等樣品制備時，不能采用含有 Triton X-100 等去垢劑的溶液，否則會干擾本試劑盒的檢測。

4、 抗氧化物會對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾，例如 0.1mM ascorbic acid，5mM GSH 都

會使測定出來的吸光度顯著升高。

5、 對于植物樣品，研磨處理應迅速，以免 SOD 酶活下降，盡量在冰浴條件下處理。

6、 如果用分光光度計，比色杯光徑應為 1cm，加入的上清及試劑量應根據(jù)比色杯的最小

要求體積而定。

7、 所用離心管或 96 孔板應潔凈透明，透光性好。

8、 一般要求各孔受光情況一致，所有反應管應排列在與日光燈燈管平行的直線上。

9、 反應溫度控制在 25℃，視酶活性高低適當調整反應時間；溫度較高時，光照時間應縮

短；溫度較低時，光照時間相應延長。

10、 如果無 4000Lx 日光，可 200W 在 10~12cm 處，照射 20min；超凈工作臺 5cm 處光強約 800~1000Lx，,照射 30~40min；強太陽光下一般光強可達 30000Lx，照射 5~15min，一般不建議直接用太陽光。

11、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

總超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒(NBT 核黃素微板法)的產(chǎn)品簡介